El Centro Consultor en Patología Perinatal y Pediátrica incluye una sección de Patología Molecular a cargo de la Dra. Mónica Drut, quien ha desarrollado y se encuentra a cargo del diagnóstico por el método de Hibridación In Situ Fluorescente (FISH).
Para ello cuanta con las siguientes sondas.
Sondas disponibles:
Centrómero : 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9,10, 11,12, 13/21, 14/22, 15, 16, 17, 18, 20, X, Y, X/Y, totales.
Satélite beta : cromosoma 9
Telómeros:
1p (1p36.3 - pter)
1p36/1q25
11p (11p15.5-pter) (S.Beckwith-Wiedemann)
19qter
19p13/19q13
Cromosoma total: 1,2,3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19, 20, 21, 22, X,Y.
Secuencias únicas específicas:
13q14
21q22.13-q22.2
22q13
Secuencias únicas para sindromes de microdeleción:
4p16.3 (S. de Wolf-Hirschhorn)/cen4
5p15 (S.de Cri du chat)
7q11.2 (S. de Elastin - Williams)/7q31
15q11-q13 : SNRPN(S. de Prader-Willi/ Angelman) /cen15/15q22
15q11-q13 : UBE3A(S. de Prader-Willi/ Angelman) /15q22
17p11.2 (S. de Smith-Magenis)/17q21.1
17p13.3 (S. de Miller-Dieker)/17q21.1
22q11.2 TUPLE(S. de DiGeorge)/22q13
10p14 DGCR2 (S. de DiGeorge II)/cen10
Xp22.3 (S. sulfatasa esteroide- ictiosis ligada X)/cenX
Secuencias únicas para oncología y hematología:
5q31
7q31
11q23
13q14.3
t(2;5)(p23;q35) : ALK breakpoint
t (9;22)(q34;q11.2) : Mbcr/abl ; mbcr/abl
t(15;17)(q22;q21.1): PML/RARA
inv(16)(p13;q22)
iso17q : 17p11.2/(17q21.3-q23)
t(22;-)(q12;-): EWS
11q22(ATM)/12q13(GLI)
13q14(DLEU)/17p13(p53)
6q21/8q24(CMYC)
Oncogenes :
N-myc (2p23-24)
Retinoblastoma (13q14)
HER-2/neu (17q11.2-q12)
Debido a lo particular de este estudio se recomienda seguir las instrucciones detallada más abajo para el envío del material.
Detección de secuencias de ADN cromosómico mediante FISH
Recomendaciones para el envío de las muestras.
En todos los casos adjuntar datos clínicos y/o de laboratorio.
Cultivos celulares (linfocitos de sangre periférica, médula ósea, vellosidades coriales, líquido amniótico, fibroblastos, tumores, etc.):
1. Fijar en solución fresca de metanol/ácido acético 3:1.
2. Tirar la muestra en el centro de portaobjetos nuevos y limpios en forma convencional
3. Dejar secar al aire
4. Almacenar en una caja limpia a temperatura ambiente (hasta 4 días)
5. NO congelar la muestra
6. Remitir dos (2) portaobjetos por marcador
Extendidos celulares (mucosa yugal, monocapa de blancos de sangre periférica, médula ósea, vellosidad corial, tumores, etc.) o improntas de tejidos en fresco (vellosidad corial, tumores, ganglio linfático, etc.):
1. Extender o improntar la muestra en el centro de portaobjetos nuevos y limpios de manera que quede una monocapa delgada
2. Fijar inmediatamente en solución fresca de metanol/ácido acético 3:1 durante 30 minutos
3. Dejar secar al aire
4. Almacenar en una caja limpia a temperatura ambiente hasta 4 días
5. NO congelar la muestra
6. Remitir dos (2) portaobjetos por marcador
Líquido amniótico (LA): Alternativas A y/o B
A)
Fijar inmediatamente 5ml de LA con 1ml de solución fresca de metanol/ácido acético 3:1 y remitir en tubo de centrífuga con tapa a rosca.
B)
1.Separar 5 ml de LA en tubo de centrífuga estéril. (preferentemente 15 - 16 semanas de gestación)
2.Centrifugar 10' a 1000 rpm.
3.Descartar sobrenadante.
4.Agregar 5 ml de solución hipotónica de Citrato de Na al 1%.
5.Incubar en estufa a 37º durante 15'.
6.Antes de centrifugar poner 5 gotas de fijador M/AA (3/1) y con tapón invertir hasta que quede homogéneo.
7.Centrifugar 10' a 1000 rpm.
8.Sacar el sobrenadante hasta la mitad aprox. y agregar 1 ml de fijador para resuspender la muestra.
9.Conservar a temperatura ambiente y enviar en tubo de centrífuga.
Semen
1-Coleccionar la muestra de semen en un envase de urocultivo.
2- Mantener a temperatura ambiente y entregar en el laboratorio en el término de una hora de eyaculado.
3-Tomar la muestra con una pipeta descartable y descargar una gota en el extremo de un portaobjeto.
4-Extender la muestra con otro portaobjeto (como los extendidos de médula ósea), dejando una “monocapa” celular.
5-Realizar 4 extendidos.
6-Fijar inmediatamente en metanol: ácido acético (3:1) durante 30 min.
7-Secar al aire.
Tejidos fijados e incluidos en parafina
1.Verificar que la muestra fue fijada en formol o formol tamponado al 10%
2.Remitir el bloque del tejido incluido en parafina
La muestra se conserva a temperatura ambiente por tiempo indefinido.
Luego de completado el estudio, el bloque de parafina es remitido al laboratorio que solicitó el estudio.
NO remitir muestras fijadas con fijador de Bouin porque no son aptas para la realización de técnicas moleculares
NO remitir cortes histológicos en blanco ante la eventualidad de tener que realizar disgregados celulares
Mónica Drut.
